IGEM競賽團隊采訪基因工程疫苗專家

7月25日下午，我們(men) 有幸前往廈門大學國家傳(chuan) 染病診斷試劑與(yu) 疫苗工程技術研究中心拜訪L教授。

L教授是基因工程疫苗方麵的專(zhuan) 家，同時，他的研究領域還包括重要傳(chuan) 染病病毒免疫表位的結構和功能研究、基於(yu) 結構的分子模擬和分子設計。7月25日下午，我們(men) 有幸前往廈門大學國家傳(chuan) 染病診斷試劑與(yu) 疫苗工程技術研究中心拜訪L教授，向他請教我們(men) 在設計大腸杆菌表麵展示係統以及CRISPR/Cas9係統中遇到的問題。

首先，我們(men) 向L教授簡要介紹了我們(men) 的課題，並提出了目前存在的問題。我們(men) 在背景調研時發現，當二者的距離足夠近時，外膜囊泡（Outer Membrane vesicles, OMVs）有概率與(yu) 細菌發生膜融合，從(cong) 而將裝載的質粒遞送到細菌中。因此在課題設計中，我們(men) 希望通過在OMVs表麵展示能與(yu) 細菌受體(ti) 結合的配體(ti) ，拉進OMVs與(yu) 細菌的距離，提升質粒遞送的效率。李教授認為(wei) ，受體(ti) 和配體(ti) 的特異性結合在原理上確實能夠使OMVs與(yu) 細菌間的距離減少，利用這種方法來提升遞送效率不失為(wei) 一個(ge) 好的選擇，但與(yu) 此同時，我們(men) 還應該關(guan) 注這種遞送方式本身的效率量級是否符合我們(men) 的期望。

隨後，我們(men) 向李教授請教如何優(you) 化表麵展示係統，提高表麵展示蛋白的效率。針對此問題，李教授認為(wei) 我們(men) 應該關(guan) 注兩(liang) 個(ge) 方麵。一是蛋白被展示在表麵的效率，生物體(ti) 內(nei) 存在複雜的蛋白表達調控機製，有時即使蛋白表達量很高，由於(yu) 生物自身的調控和限製，真正能展示在表麵的也隻有一小部分。二是蛋白被展示在表麵的方式，將細菌內(nei) 源的表麵展示蛋白作為(wei) 載體(ti) 是實現外源蛋白表麵展示的主要途徑之一。而為(wei) 了進一步提高其展示效率，可以使用柔性的Linker將載體(ti) 和被展示的蛋白連接起來，同時，在選擇載體(ti) 時，也需要注意載體(ti) 的載量。對於(yu) 表麵展示部分啟動子的選擇，李教授推薦我們(men) 在治療時使用誘導型啟動子，在需要治療時再進行誘導，而在預防時則使用組成型啟動子，提供長期有效的保護。

CRISPR/Cas9係統方麵，李教授認為(wei) 我們(men) 課題中涉及的I型係統的設計在理論層麵上沒有問題，但仍需著重關(guan) 注其是否出現脫靶效應。

最後，李教授還提出幾個(ge) 問題。我們(men) 目前的預防方法雖然是從(cong) 外部拮抗致病菌，但或許還可以考慮從(cong) 對蝦自身的免疫係統出發，建立相應的防禦機製。同時，我們(men) 還應該考慮到工程菌在對蝦的腸道中正常發揮作用的可行性。

經過這次與(yu) L教授的交流，我們(men) 對表麵展示和CRISPR/Cas9係統有了更明晰的理解。在李教授深入淺出的答疑解惑中，我們(men) 受益匪淺，不僅(jin) 收獲了一段與(yu) 業(ye) 內(nei) 大佬交流的寶貴經曆，也對課題有了更深層次的思考。