IGEM競賽團隊采訪化學化工學院副教授

2022年4月23日早9:00，我們(men) 前往廈門大學化學化工學院采訪了W老師。

W老師是廈門大學化學化工學院的副教授，她的主要研究方向是單細胞分析及其在生命科學、生物醫藥、食品安全、環境監測領域中的應用，致病菌的快速、靈敏、特異性檢測技術及化學生物學與(yu) 功能蛋白質組學研究，同時，我們(men) 了解到，其課題組內(nei) 目前正進行細胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs）的相關(guan) 研究。本次我們(men) 向她簡要介紹了項目的設計方案，並尋求她的建議與(yu) 意見。由於(yu) 我們(men) 在課題中使用的原核生物外膜囊泡（outer membrane vesicles，OMVs）與(yu) EVs有一定的相似性，我們(men) 也向她谘詢了OMVs的相關(guan) 問題。

W老師首先肯定了我們(men) 使用OMVs作為(wei) 載體(ti) 的這一想法，在水產(chan) 養(yang) 殖的複雜環境中，使用這一載體(ti) 可以有效包裹並遞送我們(men) 的目的貨物，避免在使用過程中對其功能造成損害。同時，我們(men) 也對課題中大量產(chan) 生OMVs這一設計的必要性展開討論，W老師向我們(men) 介紹，雖然我們(men) 使用了兩(liang) 種方法使大腸杆菌產(chan) 生更多的OMVs，但本質上都是通過破壞膜結構來達到目的，可能會(hui) 對大腸杆菌的生存造成一定影響。在實際使用中，由於(yu) 大腸杆菌本身就能產(chan) 生大量的OMVs，這一設計的具體(ti) 應用範圍需要進一步的考慮，如在預防階段暫不使用這一設計，而是在治療階段應用以達到快速治愈的目的。

在OMVs大量分泌的驗證性實驗設計方麵，我們(men) 的方案一選擇同時抑製兩(liang) 種外膜蛋白的表達，即外膜A蛋白（outer membrane protein A，OmpA）和脂蛋白（lipoprotein，LPP）。W老師表示，由於(yu) OmpA 與(yu) LPP 之間的聯係未知，同時抑製兩(liang) 者的表達可能會(hui) 對大腸杆菌造成較大影響。為(wei) 提高整體(ti) 實驗設計的合理性，W老師建議我們(men) 分成三組實驗進行驗證，即比較單獨沉默OmpA基因、單獨沉默LPP基因以及同時沉默兩(liang) 者時OMVs的產(chan) 量。

在OMVs提取實驗設計方麵，W老師告訴我們(men) ，目前使用超離是最快最方便的方法，但需要儀(yi) 器的支持；而對於(yu) 鎳柱純化的方法，由於(yu) OMVs的大小並不是固定的，純化前可以通過預實驗來確定所需的濾膜孔徑大小。她建議我們(men) 根據實驗所需樣品的純度選擇合適的方法，無需拘泥於(yu) 用同一種。最後，對於(yu) 使用表麵展示蛋白是否會(hui) 對大腸杆菌造成影響這一問題，W老師表示雖然可能會(hui) 提高其對外界的敏感度，但無需過度擔心。

在對W老師的采訪中，我們(men) 收獲了很多有關(guan) OMVs的知識，在課題設計和實驗設計方麵也得到很大幫助。