iGEM競賽團隊采訪醫院臨床檢驗科醫生

2022年3月22日晚8:00，我們(men) 對Y老師、L老師展開了線上采訪。

Y老師現任廈門大學婦兒(er) 醫院臨(lin) 床檢驗科副主任、檢驗醫學副教授，主要研究方向為(wei) 臨(lin) 床免疫學和臨(lin) 床分子診斷學。L老師現任婦女兒(er) 童醫院臨(lin) 床檢驗科的實驗室研究員，主要研究方向是生物傳(chuan) 感器和臨(lin) 床分子診斷學。此次采訪中，我們(men) 與(yu) 兩(liang) 位老師就利用等溫擴增技術 (Catalyzed Hairpin Assembly，英文縮寫(xie) 即CHA)進行核酸檢測進行了討論。

在簡要介紹完我們(men) 的設計思路後，我們(men) 向兩(liang) 位老師詢問了課題設計方向上較為(wei) 關(guan) 心的幾個(ge) 問題。

首先是關(guan) 於(yu) CHA特異性的問題。老師告訴我們(men) ，CHA特異性的關(guan) 鍵在檢測序列的選擇。檢測序列不僅(jin) 應具有保守度，還需要有成莖環的特異性，而莖環在不同環境中，可以生成的最穩定二級結構也是不同的。如果非目標結構較多，則會(hui) 產(chan) 生假陽性。因此檢測序列設計最重要的是使其形成二級結構的莖環盡可能少，這一目的除了可以通過軟件評估來實現，還可利用更方便的電泳方法看結構。L老師用自己的研究實例向我們(men) 展示了電泳方法，如果同一樣品可以得到多個(ge) 條帶，則說明有多個(ge) 二級結構，表明該序列特異性不太好。

此外，靈敏度和特異性是相互矛盾的。CHA靈敏度很高，檢測限度可達到10 -15mol /L，我們(men) 檢測的物質濃度遠比該檢測限度高，此時重點考慮的問題不是靈敏度，而是特異性。同時要注意，在我們(men) 使用的範圍內(nei) 檢測物濃度和信號表征是否仍舊呈線性相關(guan) 。

隨後，我們(men) 詢問了關(guan) 於(yu) CHA成本的問題。老師告訴我們(men) ，CHA每檢測一次就加一次探針，隻需要合成核酸序列，成本特別低。同時由於(yu) 我們(men) 的檢測樣本濃度遠高於(yu) CHA的檢測限度，所以不需要進行信號放大，成本會(hui) 更低。然而，由於(yu) 我們(men) 檢測的是單鏈，而靶標DNA是雙鏈，所以需要一個(ge) 將雙鏈轉換成單鏈的過程。

此外，老師還提到，由於(yu) 利用發卡結構檢測實際樣品時容易受到幹擾，因此他們(men) 實驗時會(hui) 去檢測哪些因素會(hui) 對靶標檢測性有幹擾 ，其先後順序為(wei) ：觸發序列長度、溫度、反應時間、莖環濃度和比例。同時，CHA在細菌檢測上用的比較少，在老師看來，我們(men) 的設計是一個(ge) 創新點。

最後，兩(liang) 位老師一致認為(wei) 我們(men) 設計的這種體(ti) 係是能滿足實用性需求的。同時，他們(men) 也認可了我們(men) 的課題，並表示他們(men) 的實驗室也有這方麵的項目正在進行，很樂(le) 意向我們(men) 提供幫助。